La Plateforme de Cytométrie de la SFR Necker met à disposition des équipes de recherche du site Necker l'expertise de son personnel et des appareils dédiés à la cytométrie (trieurs, analyseurs).

Tous les appareils de la plateforme sont localisés dans des laboratoires de confinement de classe L2 :

- 2 laboratoires (105A et 105C) localisés au N+1 de la Faculté de Médecine Necker, équipés des cytomètres :

  • Analyseur BD LSR Fortessa SORP (5 lasers)
  • Analyseur spectral Sony SP6800 (3 lasers)
  • Trieur BD FACS Aria II SORP (5 lasers)
  • Trieur BD FACS Aria IIIu (4 lasers)

- 1 laboratoire (105B) de "TRI INFECTIEUX" localisé au N+1 de la Faculté de Médecine Necker, équipé du cytomètre trieur Sony MA900 (4 lasers) sous pSMII

- 1 laboratoire de tri, localisé au N-1 de l'Institut Imagine, équipé du cytomètre trieur Sony SH800 (3 lasers)

La plateforme de cytométrie met également à disposition des outils d'analyse :

  • licence de site pour le logiciel FlowJo
  • logiciel Cytobank
  • des postes d'analyses post-traitement équipés des logiciels BD FACS Diva, FlowJo et Sony


 

Anthony BOVE  01 40 61 54 78 
-  
Corinne CORDIER  01 40 61 54 73 
Responsable de plateforme  
Simon FILLATREAU  01 40 61 53 20 
Référent scientifique  
Jérôme MÉGRET  01 40 61 54 75 
-  
Olivier PELLÉ  01 40 61 54 77 
-  
Emmanuelle SIX  01 42 75 44 06 
Référent scientifique  

Les trieurs (excepté le Sony SH800) sont équipés de l’automate de dépôt qui réalise le tri et le dépôt d’un nombre prédéfini de cellules sur des lames de microscope, des plaques multi-puits de culture cellulaire (96 ou 384 puits) ou des barrettes de micro-tubes pour PCR. Les trieurs peuvent trier en "Single cell" sur ces supports. Ils sont équipés de l'option "Index Sorting" qui permet d'identifier chacune des cellules déposées en plaques multi-puits.

Tout nouveau porteur de projet doit se présenter auprès du personnel de la plateforme pour pouvoir accéder aux appareils de la plateforme. Les projets sont soumis au comité scientifique de la plateforme, qui évalue la conformité des équipements de travail vis-à-vis du risque biologique, en particulier pour les demandes de "tris infectieux".

Les cellules de classe L2 doivent être fixées avant toute expérimentation sur le BD LSR Fortessa SORP.

Présentation du BD FACSAria IIIu (Trieur - BD Biosciences)

  • 4 sources d’excitation :
    • Laser 488nm
    • Laser 632nm
    • Laser 407nm
    • Laser 561nm
  • tris cellulaires avec 1 à 16 fluorochromes
  • vitesse de tri : 20 000 cellules/seconde
  • Buses 70, 85, 100 et 130um
  • software : BD FACSDiva 8
  • Index-Sorting

configuration optique du BD FACSAria IIIu

 

Présentation du BD FACSAria II SORP (Trieur - BD Biosciences)

  • 5 sources d’excitation :
    • Laser 488nm
    • Laser 632nm
    • Laser 407nm
    • Laser 355 nm
    • Laser 561 nm
  • Tris cellulaires avec 1 à 18 fluorochromes
  • Vitesse de tri : 20 000 cellules/seconde
  • Buses 70, 85 et 100um
  • Software : BD FACSDiva 8
  • Index-Sorting

configuration optique du BD FACS Aria II SORP

 

 

Présentation du SONY SH800 (Trieur - SONY)

  • 2 sources d’excitation :
    • Laser 488 nm
    • Laser 561 nm
    • Laser 640 nm
    • Détection : 6 paramètres de fluorescence peuvent être mesurés simultanément
  • Software : Sony SH800

configuration optique du SONY SH800

 

Présentation du BD LSR Fortessa SORP (Analyseur - BD Biosciences)

  • 5 sources d’excitation :
    • Laser 488 nm
    • Laser 639 nm
    • Laser 405 nm
    • Laser 561 nm
    • Laser 355nm
  • Détection : 18 paramètres de fluorescence peuvent être mesurés simultanément
  • Software : BD FACSDiva 8


configuration optique du BD LSR Fortessa SORP

 

 

Présentation du SONY SP6800 (Analyseur - SONY)

  • 3 sources d’excitation :
    • Laser 488 nm
    • Laser 638 nm
    • Laser 405 nm
  • Détection : Collecte des photons entre 400 et 800nm
  • Software : Sony SP6800


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Présentation du SONY MA900 (Trieur - SONY)

  • 4 sources d’excitation :
    • Laser 488 nm
    • laser 561 nm
    • Laser 638 nm
    • Laser 405 nm
  • Détection : 12 paramètres de fluorescence peuvent être mesurés simultanément
  • Software : Sony MA900

 

configuration optique du Sony MA900

 

 

 

 

 

 

 

Remarques

Choisir la combinaison optimale de fluorochromes pour vos panels d’anticorps est un processus complexe. Le personnel de la plateforme se tient à votre disposition pour définir avec vous, les combinaisons de fluorochromes optimales pour chaque appareil, en fonction de votre projet.

Applications

Caractérisation et isolement des populations cellulaires selon les techniques suivantes :

  • phénotypage, multi-marquages membranaires et intracellulaires
  • analyse des cellules transfectées avec des systèmes rapporteurs fluorescents
  • analyse des cellules souches hématopoïétiques « Side Population » (Hoechst 33342)
  • étude du cycle cellulaire mono-paramétrique (Cellules perméabilisées : IP, Cellules intactes : Hoechst33342), étude du cycle cellulaire multi-paramétrique (Incorporation de nucleosides : BrdU, EdU, Marquage de l’ARN avec la Pyronine), étude du cycle cellulaire avec les indicateurs colorés (rouge et vert) génétiquement encodés FUCCI
  • étude des paramètres vitaux de la cellule : prolifération cellulaire (CFSE), potentiel membranaire mitochondrial (JC-1, DiOC2, MitoTracker), activité enzymatique, intégrité membranaire (IP, colorants Sytox,7-AAD), étude des voies de signalisation (phospho-protéines)
  • dosages multiplex (cytokines) avec le BD Cytometric Bead Array
  • étude du flux calcique (Indo-1)

La Plateforme peut développer de nouvelles applications, à la demande, en fonction du potentiel technologique de nos équipements, et de leur évolution possible.

Les services proposés par la plateforme de cytométrie sont :

  • Mise à disposition des appareils pour les utilisateurs autonomes
  • Formation théorique et pratique pour devenir autonome, sur les cytomètres et les systèmes d’analyse
  • Conseil, accompagnement, assistance technique
  • Mise au point de protocoles expérimentaux
  • Aide à l’interprétation des résultats
  • Formation et Mise à disposition des logiciels d’analyse : BD FACS Diva, FlowJo, Cytobank, SONY SH800, SP6800 et MA900
  • Mise à disposition de la licence de site pour FlowJo

 

La plateforme propose également ses services aux équipes scientifiques académiques extérieures au site Necker, ainsi qu'aux porteurs de projet du secteur privé.