La plateforme Vecteurs Viraux et Transfert de Gènes (VVTG) de la SFR-Necker, Inserm US24, CNRS UMR3633, est un service académique de production de vecteurs viraux utilisés en transfert de gènes.

La plateforme VVTG, créée en 2009 fait partie des dix-huit plateformes de la Faculté de Santé de l’Université de Paris. Elle est hébergée par la Faculté de Médecine, 160 rue de Vaugirard, 75015 Paris.

Les services proposés sont ouverts aux équipes de recherche de l'Université de Paris et d'une façon générale à la recherche Publique.

La plateforme VVTG a été reconnue, par le groupement d’intérêt scientifique « Infrastructure en Biologie, Santé et Agronomie » (GIS-IBISA, (http://www.ibisa.net/), comme structure émergente en 2009.

Activités de la plateforme VVTG

BrochureVVTG_20200121

La plateforme VVTG met à la disposition des équipes de recherche son expertise dans la conception, la production et l’utilisation de vecteurs viraux.

  • La plateforme VVTG réalise la production de différents types de virus : RETROVIRUS, LENTIVIRUS, ADENOVIRUS, défectifs pour la réplication, utilisés pour le transfert de matériel génétique dans des cellules cibles.
  • Les applications concernent la thérapie additive par l’expression de cDNA, l’invalidation de l’expression de gènes cible à l’aide de shRNA, l’immortalisation cellulaire et la modification du génome par le système CRISPR / CAS 9.
  • Les productions virales sont adaptés aux applications de transfert de gènes in vitro et in vivo par la proposition de différents volumes de production.
  • La qualité des productions virales est suivie par la production de virus contrôles (lentivirus et rétrovirus) et par des tests réguliers sur l’innocuité des cultures cellulaires de la plateforme (détection des mycoplasmes).
  • La plate-forme donne des conseils sur les vecteurs viraux, en amont et en aval des productions virales.
  • La plate-forme propose certains outils viraux « types », couramment utilisés en transfert de gènes.
  • La plate-forme apporte son expertise dans la connaissance de la règlementation sur les OGM viraux.
  • La plate-forme gère un service commun L3 dont une partie sera dédiée aux clients de la plateforme et l'autre ouverte à des projets de manipulation de microorganismes de classe 3. Le projet du demandeur devra être validé par le comité de gestion du L3.

Comité de pilotage de la plateforme VVTG

Le comité de pilotage est composé de la direction de la SFR, des membres de la plateforme et de chercheurs appartenant à des équipes qui sollicitent fréquemment la plateforme pour des productions virales. Ce comité se réunit une fois par an pour analyser le fonctionnement de la plateforme en relation avec les différents sites de recherche de l’Université Paris Descartes.

Les locaux L1, L2 et L3 de la plateforme sont réservés à son personnel, à l’exception du L3 qui est un plateau technique ouvert aux membres de l'Université de Paris.

L1 : Activités de biologie moléculaire et de bactériologie avec des OGM de classe 1 (C1)

Equipement : 1 centrifugeuses réfrigérée, 1 PSM II, 1 incubateur de bactériologie, 1 spectrophotomètre, 1 pH mètre, matériel d’électrophorèse pour l’étude de l’ADN et des protéines, container de stockage azote, +4°C, -20°.

L2  : Productions et utilisation d' OGM viraux de classe 2 (C2). Immortalisation de lymphocytes B par l'EBV (B-EBV).

Equipement : 2 ultracentrifugeuse, 2 centrifugeuses dont 1 réfrigérée, 4 PSM II, 4 incubateurs CO2, 1 microscopes inversé à épi-fluorescence, 1 système de chromatographie FPLC relié à un ordinateur, 1 réfractomètre, +4°C, -20°C et -80°C.

L3 : Productions et utilisation  OGM viraux de classe 3. Manipulation de microorganismes de classe 3.

Ce L3 dispose de 36 m2 de surface répartis en trois pièces de travail.

Le local n'est pas en fonctionnement actuellement. Sa mise en exploitation est en cours de gestion.

L’équipement comprendra dans un premier temps : 1 ultracentrifugeuses, 2 centrifugeuses dont 1 réfrigérée, 1 PSM II, 2 incubateurs CO2, 1 incubateur de bactériologie, 1 microscopes inversé à épi-fluorescence, 1 +4°C, 1 -20°C et 1 -80°C. Le local dispose d’un autoclave double entrée.

L'équipement du L3 sera complété ultérieurement.

Plateforme Vecteurs Viraux et Transfert de Gènes (VVTG)

SFR Necker, US24, UMS3633

Faculté de Médecine Université de Paris

160 rue de Vaugirard

75015 Paris 

Tél : 01 40 61 54 56

ou 01 40 61 54 57

 

 

 

La personne demandant une prestation et son responsable scientifique devront prendre connaissance des Conditions générales de prestations VVTG qui régissent le fonctionnement de la plateforme vis-à-vis de ses clients.

  1. Prestations 

La plateforme VVTG réalise des productions à façon de vecteurs viraux recombinants utilisés en transfert de gènes : lentivirus, rétrovirus, adénovirus. Ces virus, défectifs pour la réplication, sont destinés uniquement à des fins de recherche pour des applications in vitro, ou in vivo chez le petit animal.

Virus actuellement produits :

  • Adénovirus (Ad5) ΔE1/ΔE3,
  • Lentivirus HIV-1 ΔU3 SIN, enveloppe : VSV-G,
  • Rétrovirus murin Mo-MLV, enveloppe VSV-G ou ECO

Projet de production de différents sérotypesd'AAV.

  1. Interactions entre le demandeur et la plateforme VVTG 

Etapes

Demandeur / Resp. Scientifique

Plateforme VVTG

Informations

Obtention d’une production virale ?

1) Contacter la plateforme

sylvie.fabrega@inserm.fr

2) Conseils et renseignements sur les prestations

Demande de production virale

3) Saisie d’une demande de production dans le formulaire demande de production et envoi du formulaire

4) Analyse du projet

Engagement projet

6) Signature devis estimatif et envoi

5) Envoi d’un devis estimatif

Envoi du matériel

7) Renseignement de la fiche échantillon

8) Envoi du matériel ADN/adénovirus

9) Réception du matériel de production

Délais

 

10)  Proposition d’une date de réalisation

Production virale

 

11)  Programmation et réalisation de la prestation

Fiche produit

13) Accord prestation

12)  Envoi du rapport de production viral

Règlement prestation

14) Engagement du processus règlement prestation

13)  Demande de règlement de la prestation

Livraison produit

16) Information disponibilité

15)  Disponibilité livraison ?

17)  Envoi de la demande d’enlèvement livreur

18)  Livraison du virus

Attestation de livraison

18) Envoi à la plateforme du rapport de production signé

 

Suivi

20) Valorisation scientifique de la prestation

19)  Prestation adaptée au besoin ?

 

  1. Caractéristiques des productions virales de la plateforme VVTG 

Caractéristiques productions Lentivirus et Rétrovirus_VVTG

Caractéristiques productions Adenovirus_VVTG

  1. Adresser un mail à pour recevoir les formulaires suivants :
  • Demande de production Lentivirus
  • Demande de production de Rétrovirus
  • Demande de production Adénovirus
  • Echantillon ADN
  • Echantillon Adénovirus

L’envoi du matériel à la plateforme est fait lorsque le devis de prestation émis par la plateforme est accepté par le demandeur et son responsable scientifique.

  1. Vecteurs viraux outils proposés

La plateforme dispose de vecteurs viraux classiquement utilisés en transfert de gènes :

  • Vecteurs d’expression lentiviraux véhiculant la GFP (avec différents promoteurs) et la construction CRE-GFP (promoteur CMV)
  • Lots de vecteurs adénoviraux :
  • adénovirus GFP,
  • adénovirus CRE-GFP,
  • adénovirus béta-galactosidase

Contactez la plateforme pour connaître la disponibilité de ces vecteurs.

  1. Délai de prestation

Un délai de prestation sera estimé à partir de la date de réception du matériel : ADN ou du virus, nécessaire aux productions virales. Le délais proposé n'est pas contractuel.

  1. Valorisation de l’activité de la plateforme

Cette reconnaissance de l’activité de la plateforme est indispensable. Se référer aux Conditions générales de prestations VVTG.

 

Tarification / Devis prestation

Le client indiquera le nom de sa structure, l'Université d'appartenance et ses tutelles.

Trois niveaux de tarifications sont proposés :

  • Site Necker : Instituts INEM et Imagine
  • Université de Paris et  INSERM
  • Académiques, extérieurs à l’Université de Paris et à l'INSERM

Information tarifs, contacter la  plateforme : - 01 40 61 54 56

Le cas particulier de prestations pour des sociétés privées pourra être étudié.

Emission d’un devis de prestation :

Un devis de prestations sera émis lorsque la plateforme recevra le formulaire de demande de production virale renseigné par le demandeur.

Prise en charge la prestation :

La prise en charge de la prestation sera faite lorsque le devis signé, avec la mention « Bon pour acceptation » du responsable scientifique du laboratoire du demandeur, sera renvoyé à la plateforme par e-mail. Tout devis rectificatif suivra la même procédure.

Agrément OGM/classe de risque

La manipulation d’OGM viraux est règlementée par le Haut Conseil des Biotechnologies (HCB).

La plateforme dispose actuellement de l' agrément n°5806 du 2/12/2019 du HCB pour la production et la manipulation d’OGM de classe 2 en confinement L2.

La structure de recherche qui réceptionnera les productions virales devra transmettre à la plateforme VVTG son numéro d'agrément OGM avec sa date d'obtention.

Les virus produits par la plateforme sont OGM viraux de classes 2 (inserts de type A).

Le directeur du laboratoire demandeur est responsable de l’application des règles d’hygiène et sécurité de sa structure et du respect de la règlementation sur les OGM viraux de classe 2 à manipuler en L2.

Le demandeur doit pour cela, contacter l’assistant de prévention de sa structure qui le guidera dans la rédaction de la demande d’agrément OGM et dans la connaissance des conditions de manipulation et de transport des OGM viraux.

Les directives de la règlementation OGM sont décrites par l’HCB. Liens utiles :

Accès L3 Faculté de Médecine Université de Paris

Le L3 de la Faculté de Médecine n'est pas encore en exploitation. Prévision d'ouverture : fin 2020.

Responsable de confinement : Sylvie. Fabrega - 01 40 61 54 56

Référent scientifique : - 01 40 61 54 06

Le local disposera d’un  Règlement intérieur et de Modalités d’accès / activité.

Un formulaire de Demande d’activité L3 devra être rempli par le demandeur pour l’examen de son projet par le comité de gestion du L3.

Tout futur projet de demande de production d'OGM viral de classe 3 avec insert de type B, ainsi que tout projet de manipulation de microorganisme sauvage de classe 3 peut être adressé dès à présent à la responsable de confinement.

Règlement intérieur

Le Règlement intérieur VVTG de la plateforme VVTG est validé par le Comité de gestion des plateformes de l’Université Paris Descartes.

Les prestations de la plateforme sont régies par le document des Conditions générales de prestation VVTG.

Publications scientifiques associant la plate-forme :

  1. Christine Salaün et al. Identification of a Novel Transport-independent Function of PiT1/SLC20A1 in the Regulation of TNF-induced Apoptosis. The Journal of Biological Chemistry. vol. 285, no. 45, pp. 34408–34418, November 5, 2010.

  2. Frédérique Rau et al. Misregulation of miR-1 processing is associated with heart defects in myotonic dystrophy. Nature Structural & Molecular Biology 2011.

  3. Vanessa Sancho-Shimizu et al. Herpes simplex encephalitis in patients with autosomal recessive and dominant TRIF deficiency” J Clin Invest. 2011 Dec; 121(12):4889-902.

  4. Mylène Heinis et al. HIF1alpha and pancreatic beta-cell development. FASEB J. 2012 Mar 20.

  5. Soggia A. et al.  Activation of the transcription factor carbohydrate responsive element-binding protein by glucose leads to increased pancreatic beta cells differentiation. Diabetologia. 2012 Oct;55(10):2713-22.

  6. Ivan Nemazanyy. Defects of Vps15 in skeletal muscles lead to autophagic vacuolar myopathy and lysosomal disease. EMBO Mol Med. 2013 Jun; 5(6):870-90.

Consultation de documents : protocoles et applications des vecteurs viraux en transfert de gènes.

 

 

Personnel de la plateforme VVTG :

  •  Laure Nay, AI Université de Paris
  • Redouane Si Bouazza, AI Université de Paris
  • Alicia Fernandes, Technicienne Inserm
  • Corentin Travet, apprentis Inserm période 2018-2020
  • Fabrega Sylvie IR Inserm, Responsable de la plateforme VVTG

 

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