La plateforme d’histologie et de morphologie est un service d'anatomopathologie animal et un service de formation aux différentes techniques d’histologie.

Selon votre demande de prestation, la plateforme prend en charge vos échantillons (inclusion, coupe, coloration, mise au point de marquage, et/ou scan de lame en fond clair ou en fluorescence). Elle peut aussi former un membre de votre équipe qui pourra alors accéder aux différents postes de travail (inclusion, microtome, cryostat, microdissecteur laser) pour conduire lui même vos études en bénéficiant de l'apport de notre expérience et de la technologie de ce plateau.

La plateforme dispose actuellement de l'ensemble des équipements nécessaires à la réalisation des techniques histologiques de routine et des techniques d'immunohistochimie sur prélèvements fixés ou congelés.

  • Sara Fontoura  01 72 60 63 78 
    -  
  • La plateforme est située au RDC Bas du bâtiment Leriche (Porte 9) sur le site de Broussais.

    Le laboratoire principal (pièce L-RB126) :

    Cette pièce réservée aux études d'histologie simples (coupes et / ou colorations) dispose :

    • de trois microtomes semi-automatiques (2 x HM 340E, Microm France et RM2145, Leica) pour la réalisation de coupes en  paraffine.
    • d’un cryostat (CM1850 Leica) pour la réalisation de coupes congelées.
    • d’une imprimante de lame (SlideMate, Thermo Scientific)

     

    • d’un automate d’infiltration des tissus sous vide (ASP300S, Leica) permettant la conduite de la déshydratation automatique et l'imprégnation en paraffine de 200 échantillons par jour. Cet automate est confiné dans une armoire avec un système d’extraction d’air afin de protéger les utilisateurs.
    • d’une plaque d’inclusion (EC-350, Microm France)
    • d’une sorbonne pour l’utilisation des produits chimiques
    • d’un microscope (DME, Leica) permettant un contrôle constant de la qualité des coupes et des colorations

                                     

    • d'un multistainer (ST5020-CV5030, Leica) permettant de réaliser les colorations classiques et spécifiques des tissus et d'effectuer le montage avec lamelle.
    • d'une loupe binoculaire (Stemi 508) pour l'orientation des échantillons lors de l'inclusion en résine pour la technique HREM
    • d'un BOA (Cermap) pour l'aspiration des vapeurs toxiques lors de l'inclusion (résine et paraffine)

     

    Les pièces annexes (L-RB36/39, L-RB112) :

                                    

    • La plateforme dispose aussi d’un Microdissecteur Laser (Palm MicroBeam, Zeiss). Cet appareil vous permet d’étudier des acides nucléiques (ADN/ARN) et des protéines de sous-populations cellulaires spécifiques.

                                   

    • La plateforme possède une pièce RNAse free (pièce couplée au microdissecteur laser). Celle-ci dispose
      • d’un cryostat (CM3050S, Leica) pour la réalisation des coupes congelées destinées à la microdissection laser.
      • d’une ETRAF pour la manipulation des produits chimiques.

     

                                   

    • La plateforme dispose d’un scanner de lame (Nanozoomer 2.0, Hamamatsu) associé à un logiciel de gestion et de distribution d’image (Calopix, Tribvn). Ce système permet de réaliser des lames virtuelles en fond clair ou en fluorescence. Les lames virtualisées sont exploitables via NDPview (software d’observation et d’annotation Hamamatsu) ou par Calopix. C’est un logiciel permettant d’associer des données à une lames virtuelles dans une arborescence logique à des fins de traçabilité (système de gestion) et quantifier et/ou compter les marquages de ces lames (système de traitement d’image). 

    Caractéristiques :

    • Objectif 20x NA 0.75 à grossissement global 20X ou 40X
    • Résolution :
      • 0.23 μm/pixel (40× high resolution mode)
      • 0.46 μm/pixel (20× standard mode)
    • Chargeur jusqu'à 210 lames en même temps
    • Possibilité de faire des acquisitions de piles d'images

                                   

    • Depuis fin 2015, la plateforme d’histologie dispose d’un OHREM (Optical High Resolution Episcopic Microscope, Indigo Scientific). Ce nouvel appareil permet de réaliser des coupes d'échantillons inclus en résine et d'effectuer l'acquisition d'images à chaque coupe. Ces images sont importées dans un software pour visualiser en 2D ou 3D l’échantillon avec une résolution de 1µm en axe Z.

    Caractéristiques :

    • 2 sources de lumière : 585nm ou 470nm
    • Epaisseur de coupe : 1 à 5µm
    • Dimension de l’échantillon : jusqu’à 20mm
    • Résolution : 4 ou 12 megapixel
    • Image JPG ou TIF
    • Temps de coupe : 2 à 12 heures (dépend de la taille de l’échantillon et de la résolution).

    Plateforme d’Histologie et de Morphologie du petit animal

    Sophie Berissi, Noémie Gadessaud et Sara Fontoura

     

    histo.sfrnecker@inserm.fr

     

    Pièce L-RB126, Bureaux : L-RB115
    Faculté de Médecine Paris Descartes – site Broussais

    14 Rue Maria Helena Vieira Da Silva, CS61431

    Batîment Leriche, 75993 Paris Cedex 14

     

    Tél. 01.72.60.63.78

     

    et

     

    Fabiola TERZI

     

    fabiola.terzi@inserm.fr

     

    Centre de Recherche INEM
    Tour Lavoisier, 6ème étage, porte 622
    Hôpital Necker Enfants Malades

     149, Rue de Sèvres, 75015 Paris

     

    Tél : 01.44.49.52.45

    Prestations proposées:

    La plateforme prend en charge vos échantillons et réalise les prestations de votre choix :

    • l’inclusion en paraffine
    • la coupe : en congélation (5-30µm) et/ ou en paraffine (4µm)
    • les colorations histologiques : coloration standard  (Hématoxyline – Eosine, Bleu de toluidine) ou colorations spécifiques du collagène (Trichrome de Masson, Picro-sirius), des polysaccharides (Periodic Acid Schiff)
    • Virtualisation de lames grâce à un scanner Hamamatsu, en lumière blanche et en fluorescence. (Activité ouverte aux équipes académiques)
    • Coupe d'échantillon inclus dans une résine et acquisition d'images grâce à l'OHREM permettant la reconstitution 3D des échantillons via des softwares.
    • la mise au point d’anticorps en immunohistochimie.

     

    La plateforme assure aussi la formation d’un ou plusieurs membres de votre équipe :

    • à l’utilisation des équipements de microtomie (microtome et cryostat) afin d’y être autonome et d’en disposer quand vous le souhaitez
    • aux colorations et à la mise au point de marquages immuno-histochimiques 
    • A la microdissection laser (formation et accompagnement)
    • A l'analyse d'image sur le logiciel Calopix.
       

    Demande de prestation et/ou de formation:

    En fonction de la demande de prestation et/ou de formation, il est obligatoire de remplir les fiches suivantes et de les envoyer par email à

    • Imprimer, lire, approuver et signer la charte d'utilisation de la plateforme par le chef d'équipe et par chaque utilisateur de la plateforme:

                Charte plateforme d'histologie - responsable d'équipe   ;   Charte plateforme d'histologie - utilisateur

    • Pour les demandes d’Inclusion, Coupe, Coloration, IHC, lames virtuelles : 

                  Fiche ETUDE PH (site Necker)à remplir et envoyer à chaque dépôt d'échantillons  

                 Fiche ETUDE PH (académique): pour les demandes de virtualisation de lames. à remplir et envoyer à chaque dépôts de lames.

    • Pour les demandes de formation : Fiche FORMATION
    • Pour les projets de microdissection: nous contacter

     

    Pour l’utilisation des appareils de la plateforme :

    • cryostat et microtome : il est indispensable d’avoir été formé par l’un des membres de la plateforme, de vous inscrire sur le site intranet Nina et de veillez à nettoyer le matériel utilisé afin de le rendre dans l’état initial.
    • microdissecteur laser : vous devez obligatoirement suivre une formation dispensé par l’un des membres de la plateforme, puis de vous inscrire sur le site intranet Niina.

     

    La tarification 2017

    Cette partie est en cours de mise à jour

    La tarification Interne*

     * les tarifs internes ne concernent que les équipes du site Necker, rattachées aux instituts INEM et Imagine.

     

    La tarification Académique


     

    Pol JG, Lekbaby B, Redelsperger F, Klamer S, Mandouri Y, Ahodantin J, Bieche I, Lefevre M, Souque P, Charneau P, Gadessaud N, Kremsdorf D,Soussan P. Alternative splicing-regulated protein of hepatitis B virus hacks the TNF-α-stimulated signaling pathways and limits the extent of liver inflammation. FASEB J. 2015 May;29(5):1879-89.

    Le Corre S, Viau A, Burtin M, El-Karoui K, Cnops Y, Terryn S, Debaix H, Bérissi S, Gubler MC, Devuyst O, Terzi F. Cystic gene dosage influences kidney lesions after nephron reduction. Nephron. 2015;129(1):42-51

    Canaud G, Bienaimé F, Viau A, Treins C, Baron W, Nguyen C, Burtin M, Berissi S, Giannakakis K, Muda AO, Zschiedrich S, Huber TB, Friedlander G, Legendre C, Pontoglio M, Pende M, Terzi F. AKT2 is essential to maintain podocyte viability and function during chronic kidney disease. Nat Med. 2013 Oct;19(10):1288-96.

    Brezillon N, Brunelle MN, Massinet H, Giang E, Lamant C, DaSilva L, Berissi S, Belghiti J, Hannoun L, Puerstinger G, Wimmer E, Neyts J, Hantz O, Soussan P, Morosan S, Kremsdorf D. Antiviral activity of Bay 41-4109 on hepatitis B virus in humanized Alb-uPA/SCID mice. PLoS One. 2011;6(12):e25096

    Alliouachene S, Tuttle RL, Boumard S, Lapointe T, Berissi S, Germain S, Jaubert F, Tosh D, Birnbaum MJ, Pende M. Constitutively active Akt1 expression in mouse pancreas requires S6 kinase 1 for insulinoma formation. J Clin Invest. 2008 Nov;118(11):3629-38.

     

    En remerciement dans les publications suivantes :

    • El Karoui K, et al. Endoplasmic reticulum stress drives proteinuria-induced kidney lesions via Lipocalin 2. Nat Commun. 2016 Jan 20;7:10330.

    • Nemazanyy I, et al. Class III PI3K regulates organismal glucose homeostasis by providing negative feedback on hepatic insulin signalling. Nat Commun. 2015 Sep 21;6:8283.

    • Sackmann-Sala L, et al. Human and murine prostate basal/stem cells are not direct targets of prolactin. Gen Comp Endocrinol. 2015 Sep 1;220:133-42.

    • Bernichtein S, et al. Anti-inflammatory properties of Lipidosterolic extract of Serenoa repens (Permixon®) in a mouse model of prostate hyperplasia. Prostate. 2015 May;75(7):706-22.

    • Bernichtein S, et al. High milk consumption does not affect prostate tumor progression in two mouse models of benign and neoplastic lesions. PLoS One. 2015 May 4;10(5):e0125423.

    • Quetier I, et al. C-terminal-truncated hepatitis B virus X protein enhances the development of diethylnitrosamine-induced hepatocellular carcinogenesis. J Gen Virol. 2015 Mar;96(Pt 3):614-25.

    • Sackmann-Sala L, et al. Prolactin-induced prostate tumorigenesis links sustained Stat5 signaling with the amplification of basal/stem cells and emergence of putative luminal progenitors. Am J Pathol. 2014 Nov;184(11):3105-19.

    • Soggia A, et al. Von Hippel-Lindau gene disruption in mouse pancreatic progenitors and its consequences on endocrine differentiation in vivo: importance of HIF1-α and VEGF-A upregulation. Diabetologia. 2014 Nov;57(11):2348-56.

    • Ferraris J, et al. Prolactin induces apoptosis of lactotropes in female rodents. PLoS One. 2014 May 23;9(5):e97383.

    • Rachdi L, et al. Dyrk1A induces pancreatic β cell mass expansion and improves glucose tolerance. Cell Cycle. 2014;13(14):2221-9

    • Liang N, et al. Regulation of YAP by mTOR and autophagy reveals a therapeutic target of tuberous sclerosis complex. J Exp Med. 2014 Oct 20;211(11):2249-63.

    • Korneychuk N, et al. Interleukin 15 and CD4+ T Cells Cooperate to Promote Small Intestinal Enteropathy in Response to Dietary Antigen. Gastroenterology. 2013 Dec 18.

    • Auffret J, et al. Defective prolactin signaling impairs pancreatic β-cell development during the perinatal period. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2013 Nov 15;305(10):E1309-18.

    • Quétier I, et al. Hepatitis B virus HBx protein impairs liver regeneration through enhanced expression of IL-6 in transgenic mice. J Hepatol. 2013 Aug;59(2):285-91.

    •  Nemazanyy I, et al. Defects of Vps15 in skeletal muscles lead to autophagic vacuolar myopathy and lysosomal disease. EMBO Mol Med. 2013 Jun;5(6):870-90.
    • Dion S, et al. Adeno-associated virus mediated gene transfer leads to persistent hepatitis B virus replication in mice expressing HLA-A2 and HLA-DR1 molecules. J Virol. 2013 Mar 6
    • Forand A, et al. EKLF-driven PIT1 expression is critical for mouse erythroid maturation in vivo and in vitro. Blood. 2013 Jan 24;121(4):666-78.
    • Treins C, et al. The combined deletion of S6K1 and Akt2 deteriorates glycemic control in a high-fat diet. Mol Cell Biol. 2012 Oct;32(19):4001-11.
    • Laouari D, et al. A transcriptional network underlies susceptibility to kidney disease progression. EMBO Mol Med. 2012 Aug;4(8):825-39. 
    • Ferraris J, et al. Prolactin receptor antagonism in mouse anterior pituitary: effects on cell turnover and prolactin receptor expression. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2012 Feb;302(3):E356-64
    • Panasyuk G, et al. PPARγ contributes to PKM2 and HK2 expression in fatty liver. Nat Commun. 2012 Feb 14;3:672
    • Espeillac C, et al. S6 kinase 1 is required for rapamycin-sensitive liver proliferation after mouse hepatectomy. J Clin Invest. 2011 Jul;121(7):2821-32
    • Laouari D, et al. TGF-alpha mediates genetic susceptibility to chronic kidney disease. J Am Soc Nephrol. 2011 Feb;22(2):327-35.
    • Viau A, et al. Lipocalin 2 is essential for chronic kidney disease progression in mice and humans. J Clin Invest. 2010 Nov 1;120(11):4065-76.
    • Rouet V, et al. Local prolactin is a target to prevent expansion of basal/stem cells in prostate tumors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010 Aug 24;107(34):15199-204.
    • Nikolov IG, et al. Tissue accumulation of lanthanum as compared to aluminum in rats with chronic renal failure--possible harmful effects after long-term exposure. Nephron Exp Nephrol. 2010;115(4):e112-21.
    • Beck L, et al. The phosphate transporter PiT1 (Slc20a1) revealed as a new essential gene for mouse liver development. PLoS One. 2010 Feb 10;5(2):e9148.
    • Bachelot A, et al. Prolactin independent rescue of mouse corpus luteum life span: identification of prolactin and luteinizing hormone target genes. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2009 Sep;297(3):E676-84.
    • Moriceau S, et al. Coronin-1 is associated with neutrophil survival and is cleaved during apoptosis: potential implication in neutrophils from cystic fibrosis patients. J Immunol. 2009 Jun 1;182(11):7254-63.

    Base de données "Anticorps"

    La plateforme met à votre disposition une base de données qui répertorie l’ensemble des anticorps primaires utilisés par les équipes du centre de recherche. Elle peut être consultée sous forme papier et informatique. Pour chaque anticorps, vous trouverez :

    • la fiche technique fournisseur
    • la fiche technique donné par l’équipe qui l’utilise : précisant son domaine d’application, l’espèce testée
    • le protocole IHC mis au point par l’équipe

    Ainsi, en consultant cette banque anticorps vous obtiendrez un gain de temps considérable et vous éviterez certaines mises au point si celle-ci ont déjà été faites par une autre équipe. Cependant, il reste bien évident que chaque équipe doit faire l’effort de remplir les fiches pour chacun de leur anticorps et ce régulièrement afin que cette base de données soit régulièrement actualisée.
     

    Bibliothèque

    • Histologie et biologie cellulaire – une introduction à l’anatomie pathologique (Kierszenbaum, 2006, De Boeck)
    • Atlas d’histologie fonctionnelle de Weather (Young, Lowe, Stevens and Heath, 2008, De Boeck)
    • The Atlas of Mouse Development (Kaufman, Academic Press)
    • A Colour Atlas of Anatomy of small laboratory animals – Volume two: Rat / Mouse / Hamster (Popesko, Rajtova, Horak, Saunders) (prêté par l’équipe Pende)
    • The Mouse brain in Stereotaxic Coordinates (Paxinos, Franklin, Academic Press)
    • Manipulating the Mouse Embryo – Techniques for Visualizing Gene Products, Cells, Tissues, and Organ Systems (Nagy, Gerstenstein, Vintersten, Berhinger, Cold spring harbor laboratory press)

    Vous pouvez aussi consulter de la documentation issue du web ou de formation sur les colorations histologiques (Service d’Anapathomologie Necker), l’hybridation in situ (Roche et formation Inserm), la microdissection laser (Leica, formation Inserm, Zeiss, Publications), l’histologie (cours PCEM Paris 6).

    Tissuthèque

    La plateforme a constitué une tissuthèque afin de mettre à votre disposition de nombreux tissus de souris contrôles inclus en paraffine pouvant servir de tissu contrôle lors de marquages immunohistochimiques. Une banque de nombreux tissus de souris contrôles âgées de 8-10 semaines :

    • cerveau / cœur / foie / intestin / muscle / ovaire / peau / poumon / rate / rein / testicule / thymus / utérus
    • fixation en PFA 4% 24h
    • inclusion en paraffine
    • 2 fonds génétiques : FVB/N, C57Bl6
    • 2 sexes : ♂, ♀