La Plateforme de Cytométrie de la SFR Necker met à disposition des équipes de recherche des sites Necker, Imagine et Broussais des appareils dédiés à la cytométrie (trieurs, analyseurs et Imageur de Flux) et l’expertise de son personnel.

 


  • Jérôme Mégret  01 72 60 63 36 
    -  
  • Olivier Pellé  01 42 75 44 14 
    Responsable antenne Imagine  
  • Les trieurs sont dédiés aux tris de cellules de classe L1 et L2, ne contenant pas d’agents pathogènes pour l’homme, ou génétiquement modifiées par des vecteurs viraux dont la perte de la pathogénicité est sûrement établie. Ils sont équipés de l’automate de dépôt : cette option réalise le tri et le dépôt d’un nombre prédéfini de cellules sur des lames de microscope, des plaques multi-puits de culture cellulaire ou des barrettes de micro-tubes pour PCR.

    Les tris de bactéries, et levures ne sont pas acceptés sur les trieurs de l’Institut Imagine.

    Les cellules de classe L2 doivent être fixées avant toute expérimentation sur le BD LSR Fortessa SORP.

    Présentation du BD FACSAria IIIu (Trieur - BD Biosciences)

    • 4 sources d’excitation :
      • Laser 488nm
      • Laser 632nm
      • Laser 407nm
      • Laser 561nm
    • tris cellulaires avec 1 à 16 fluorochromes
    • vitesse de tri : 20 000 cellules/seconde
    • Buses 70, 85, 100 et 130um
    • software : BD FACSDiva 8
    • Index-Sorting

    configuration optique du BD FACSAria IIIu

     

    Présentation du BD FACSAria II SORP (Trieur - BD Biosciences)

    • 5 sources d’excitation :
      • Laser 488nm
      • Laser 632nm
      • Laser 407nm
      • Laser 355 nm
      • Laser 561 nm
    • Tris cellulaires avec 1 à 18 fluorochromes
    • Vitesse de tri : 20 000 cellules/seconde
    • Buses 70, 85 et 100um
    • Software : BD FACSDiva 8
    • Index-Sorting

    configuration optique du BD FACS Aria II SORP

     

     

    Présentation du SONY SH800 (Trieur - SONY)

    • 2 sources d’excitation :
      • Laser 488 nm
      • Laser 561 nm
      • Détection : 6 paramètres de fluorescence peuvent être mesurés simultanément
    • Software : SONY SH800

    configuration optique du SONY SH800

     

    Présentation du BD LSR Fortessa SORP (Analyseur - BD Biosciences)

    • 5 sources d’excitation :
      • Laser 488 nm
      • Laser 639 nm
      • Laser 405 nm
      • Laser 561 nm
      • Laser 355nm
    • Détection : 18 paramètres de fluorescence peuvent être mesurés simultanément
    • Software : BD FACSDiva 8


    configuration optique du BD LSR Fortessa SORP

     

     

    Présentation du SONY SP6800 (Analyseur - SONY)

    • 3 sources d’excitation :
      • Laser 488 nm
      • Laser 638 nm
      • Laser 405 nm
    • Détection : Collecte des photons entre 400 et 800nm
    • Software : SP6800


     

     

     

    Présentation de l'AMNIS Image Stream

    • 5 sources d’excitation :
      • Laser 488 nm
      • Laser 642 nm
      • Laser 375 nm
      • Laser 405 nm
      • Laser 560 nm
    • Software : Ideas

    configuration optique AMNIS Image Stream

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    Remarques

    Choisir la combinaison optimale de fluorochromes pour vos panels d’anticorps est un processus complexe. Le personnel de la plateforme se tient à votre disposition pour définir avec vous, les combinaisons de fluorochromes optimales pour chaque appareil, en fonction de votre projet.

    Applications

    Caractérisation et isolement des populations cellulaires selon les techniques suivantes :

    • phénotypage, multi-marquages membranaires et intracellulaires
    • analyse des cellules transfectées avec des systèmes rapporteurs fluorescents
    • analyse des cellules souches hématopoïétiques « Side Population » (Hoechst 33342)
    • étude du cycle cellulaire mono-paramétrique (Cellules perméabilisées : IP, Cellules intactes : Hoechst33342), étude du cycle cellulaire multi-paramétrique (Incorporation de nucleosides : BrdU, EdU, Marquage de l’ARN avec la Pyronine), étude du cycle cellulaire avec les indicateurs colorés (rouge et vert) génétiquement encodés FUCCI
    • étude des paramètres vitaux de la cellule : prolifération cellulaire (CFSE), potentiel membranaire mitochondrial (JC-1, DiOC2, MitoTracker), activité enzymatique, intégrité membranaire (IP, colorants Sytox,7-AAD), étude des voies de signalisation (phospho-protéines)
    • dosages multiplex (cytokines) avec le BD Cytometric Bead Array
    • étude du flux calcique (Indo-1)

    La Plateforme peut développer de nouvelles applications, à la demande, en fonction du potentiel technologique de nos équipements, et de leur évolution possible.

    Les services proposés par la plateforme de cytométrie sont :

    • Mise à disposition des appareils pour les utilisateurs autonomes et les utilisateurs non-autonomes

    Le trieur Sony SH800 est disponible en séance non assistée après une rapide formation de 1 heure

    • Formation théorique et pratique pour devenir autonome, sur les cytomètres et les systèmes d’analyse
    • Conseil, accompagnement, assistance technique
    • Mise au point de protocoles expérimentaux
    • Aide à l’interprétation des résultats
    • Formation et Mise à disposition des logiciels d’analyse : BD FACS Diva, FlowJo, Ideas, SONY SH800 et SP6800
    • Mise à disposition de la licence de site pour FlowJo

     

    TARIFICATION 2018 - sites Necker - Imagine - Broussais

    Pour le BD FACS Aria IIIu, BD FACS Aria II SORP, BD LSR Fortessa SORP, Sony SH800 et Sony SP6800 :

    Tarif utilisateur autonome : 24 €/heure

    Tarif utilisateur non – autonome : 35 €/heure

    Pour l'Imageur en flux (AMNIS ImageStream) : voir avec michael.dussiot@institutimagine.org

    L’utilisation des postes d’analyse est gratuite.