La Plateforme de Cytométrie de la SFR Necker met à disposition des équipes de recherche du site Necker des appareils dédiés à la cytométrie et l’expertise de son personnel.

Nouveautés sur la Plateforme :

  • Nous venons d’acquérir l'Analyseur Spectral SP6800 de SONY : ce tout nouvel appareil possède un environnement très intuitif, le destinant à des utilisateurs autonomes.

Le SP6800 utilise la technologie spectrale pour optimiser la sensibilité et améliorer la détection de signaux faibles en collectant les photons de 420nm à 800nm. La technologie spectrale simplifie la conception de panels multi - couleurs, en éliminant les filtres bande - passante et les matrices de compensation conventionnelles.
La déconvolution spectrale mise en œuvre rend l'analyse plus simple et plus facile en séparant les empreintes spectrales individuelles de chaque fluorochrome. On obtient une image plus complète des populations rares. Les complexités associées au travail avec les protéines fluorescentes et les fluorochromes excités par plusieurs lasers sont diminuées.

  • Le cytomètre trieur du site de Broussais  (BD FACS Aria I) a été upgradé en FACS Aria IIIu : l’upgrade améliore les systèmes fluidique, informatique et surtout optique (une source d’excitation supplémentaire : le laser 561nm, et 6 détecteurs pour les BV sur le laser Violet)
  • Le logiciel BD FACS DIVA version 8 est installé sur le BD FACS Aria IIIu :
  • La version 8 permet de faire des Overlays, Undo/Redo et Copy/Paste de tous les éléments de la Worksheet.

  • Cette version introduit une nouvelle application très innovante : L’Index Sorting.

Elle permet aux utilisateurs qui trient et déposent une cellule unique dans des plaques multi-puits (96 puits par exemple), d’examiner le phénotype de chaque cellule collectée, de les identifier sur des graphes et établir un rapport complet pour chaque cellule.

 

Ces appareils sont répartis sur les 2 sites Necker et Broussais :

  NECKER BROUSSAIS
Référents =  Olivier Pellé Jérome Mégret Corinne Cordier
Cytomètres =  BD FACSAria II SORP BD FACSAria IIIu BD LSR Fortessa SORP
SONY SH800 et SONY SP6800    
 
AMNIS Image Stream    
   

 

  • Jérôme Mégret  01 72 60 63 36 
    -  
  • Olivier Pellé  01 42 75 44 14 
    Responsable antenne Imagine  
  • Les trieurs sont dédiés aux tris de cellules de classe L1 et L2, ne contenant pas d’agents pathogènes pour l’homme, ou génétiquement modifiées par des vecteurs viraux dont la perte de la pathogénicité est sûrement établie. Ils sont équipés de l’automate de dépôt : cette option réalise le tri et le dépôt d’un nombre prédéfini de cellules sur des lames de microscope, des plaques multi-puits de culture cellulaire ou des barrettes de micro-tubes pour PCR.

    Les tris de bactéries, et levures ne sont pas acceptés sur les trieurs de l’Institut Imagine.

    Les cellules de classe L2 doivent être fixées avant toute expérimentation sur le BD LSR Fortessa SORP.

    Présentation du BD FACSAria IIIu (Trieur - BD Biosciences)

    • 4 sources d’excitation :
      • Laser 488nm
      • Laser 632nm
      • Laser 407nm
      • Laser 561nm
    • tris cellulaires avec 1 à 16 fluorochromes
    • vitesse de tri : 20 000 cellules/seconde
    • Buses 70, 85 et 100um
    • software : BD FACSDiva 8

    configuration optique du BD FACSAria IIIu

    Présentation du BD FACSAria II SORP (Trieur - BD Biosciences)

    • 5 sources d’excitation :
      • Laser 488nm
      • Laser 632nm
      • Laser 407nm
      • Laser 355 nm
      • Laser 561 nm
    • Tris cellulaires avec 1 à 18 fluorochromes
    • Vitesse de tri : 20 000 cellules/seconde
    • Buses 70, 85 et 100um
    • Software : BD FACSDiva 6

    configuration optique du BD FACS Aria II SORP

    Présentation du SONY SH800 (Trieur - SONY)

     

    • 2 sources d’excitation :
      • Laser 488 nm
      • Laser 561 nm
      • Détection : 6 paramètres de fluorescence peuvent être mesurés simultanément
    • Software : SONY SH800

    configuration optique du SONY SH800

     

    Présentation du BD LSR Fortessa SORP (Analyseur - BD Biosciences)

     

    • 5 sources d’excitation :
      • Laser 488 nm
      • Laser 639 nm
      • Laser 405 nm
      • Laser 561 nm
      • Laser 355nm
    • Détection : 18 paramètres de fluorescence peuvent être mesurés simultanément
    • Software : BD FACSDiva 6

    configuration optique du BD LSR Fortessa SORP

    Présentation du SONY SP6800 (Analyseur - SONY)

     

    • 2 sources d’excitation :
      • Laser 488 nm
      • Laser 638 nm
      • Laser 405 nm
    • Détection : Collecte des photons entre 400 et 800nm
    • Software : SP6800


     

    Présentation de l'AMNIS Image Stream

     

    • 5 sources d’excitation :
      • Laser 488 nm
      • Laser 642 nm
      • Laser 375 nm
      • Laser 405 nm
      • Laser 560 nm
    • Software : Ideas

    configuration optique AMNIS Image Stream

     

     

     

    Remarques

    Choisir la combinaison optimale de fluorochromes pour vos panels d’anticorps est un processus complexe. Le personnel de la plateforme se tient à votre disposition pour définir avec vous, les combinaisons de fluorochromes optimales pour chaque appareil, en fonction de votre projet.

     

     

    Applications

    Caractérisation et isolement des populations cellulaires selon les techniques suivantes :

    • phénotypage, multi-marquages membranaires et intracellulaires
    • analyse des cellules transfectées avec des systèmes rapporteurs fluorescents
    • analyse des cellules souches hématopoïétiques « Side Population » (Hoechst 33342)
    • étude du cycle cellulaire mono-paramétrique (Cellules perméabilisées : IP, Cellules intactes : Hoechst33342), étude du cycle cellulaire multi-paramétrique (Incorporation de nucleosides : BrdU, EdU, Marquage de l’ARN avec la Pyronine), étude du cycle cellulaire avec les indicateurs colorés (rouge et vert) génétiquement encodés FUCCI
    • étude des paramètres vitaux de la cellule : prolifération cellulaire (CFSE), potentiel membranaire mitochondrial (JC-1, DiOC2, MitoTracker), activité enzymatique, intégrité membranaire (IP, colorants Sytox,7-AAD), étude des voies de signalisation (phospho-protéines)
    • dosages multiplex (cytokines) avec le BD Cytometric Bead Array
    • étude du flux calcique (Indo-1)

    La Plateforme peut développer de nouvelles applications, à la demande, en fonction du potentiel technologique de nos équipements, et de leur évolution possible.

      NECKER BROUSSAIS
    Référents =  Olivier Pellé Jérome Mégret Corinne Cordier
    Equipements = 

    BD FACSAria II SORP

    SONY SH800 et SP6800

    AMNIS Image Stream

    BD FACSAria IIIu

    BD LSR Fortessa SORP

     

    Adresse = 

    Bâtiment Imagine
    pièce S6
    24 bd du Montparnasse
    75015 Paris

    Bâtiment Leriche
    L-RB122
    Faculté de Médecine Paris Descartes
    14 rue Maria Helena Vieira Da Silva CS61431
    75014 Paris

    Bâtiment Leriche
    L-RB119

    Faculté de Médecine Paris Descartes
    14 rue Maria Helena Vieira Da Silva CS61431
    75014 Paris

     

    Les services proposés par la plateforme de cytométrie sont :

    • Mise à disposition des appareils pour les utilisateurs autonomes et les utilisateurs non-autonomes

    Le trieur Sony SH800 est disponible en séance non assistée après une rapide formation de 1 heure

    • Formation théorique et pratique pour devenir autonome, sur les cytomètres et les systèmes d’analyse
    • Conseil, accompagnement, assistance technique
    • Mise au point de protocoles expérimentaux
    • Aide à l’interprétation des résultats
    • Formation et Mise à disposition des logiciels d’analyse : BD FACS Diva, FlowJo, Ideas, SONY SH800 et SP6800
    • Mise à disposition de la licence de site pour FlowJo

     

    TARIFICATION

    Tarif utilisateur autonome : 20 €/heure

    Tarif utilisateur non – autonome : 30 €/heure

    L’Imageur en flux (AMNIS ImageStream) et l’Analyseur Spectral de SONY SP6800 sont gratuits en 2016.

    L’utilisation des postes d’analyse est gratuite.