La plateforme Vecteurs Viraux et Transfert de Gènes (VVTG) de l’US/SFR-Necker est un service de production de vecteurs viraux utilisés en transfert de gènes. La plateforme VVTG, créée en 2009 et gérée par l’Inserm (US /SFR-Necker), fait partie des cinq plateformes de l’Université Paris Descartes. Les services proposés sont aussi ouverts aux équipes de recherche publiques ou privées, extérieures à l’Université Paris Descartes. La plateforme VVTG est hébergée par la Faculté de Médecine de Necker. Elle est actuellement installée dans le bâtiment Leriche du site de Broussais à Paris.

La plateforme VVTG a été reconnue, par le groupement d’intérêt scientifique « Infrastructure en Biologie, Santé et Agronomie » (GIS-IBISA, (http://www.ibisa.net/), comme structure émergente en 2009.

Activités de la plateforme VVTG

La plateforme VVTG met à la disposition des équipes de recherche son expertise dans la conception, la production et l’utilisation de vecteurs viraux.

  • La plateforme VVTG réalise la production de différents types de virus : RETROVIRUS, LENTIVIRUS, ADENOVIRUS et ADENO-ASSOCIATED VIRUS (AAV), défectifs pour la réplication, utilisés pour le transfert de matériel génétique dans des cellules cibles. Les applications concernent la thérapie additive par l’expression de cDNA, l’invalidation de l’expression de gènes cible à l’aide de shRNA et l’immortalisation cellulaire.
  • Les conditionnements de productions virales sont adaptés aux applications de transfert de gènes in vitro et in vivo.
  • La qualité des productions virales est suivie par la production de virus contrôles (lentivirus et rétrovirus) et par des tests réguliers sur l’innocuité des cultures cellulaires de la plateforme (détection des mycoplasmes).
  • La plate-forme donne des conseils sur les vecteurs viraux, en amont et en aval des productions virales.
  • La plate-forme propose certains outils viraux « types », couramment utilisés en transfert de gènes.
  • La plate-forme apporte son expertise dans la connaissance de la règlementation sur les OGM viraux.
  • La plate-forme gère un service commun L3 (ouverture prochaine), dont une partie sera dédiée aux clients de la plateforme. Le projet du demandeur devra être validé par le comité de gestion du L3.

Comité de pilotage de la plateforme VVTG

Le comité de pilotage est composé de la direction de la SFR, des membres de la plateforme et de chercheurs appartenant à des équipes qui sollicitent fréquemment la plateforme pour des productions virales. Ce comité se réunit une fois par an pour analyser le fonctionnement de la plateforme en relation avec les différents sites de recherche de l’Université Paris Descartes.

  • Alicia Fernandes  01 72 60 63 42 
    -  
  • Les locaux L1, L2 et L3 de la plateforme sont réservés à son personnel à l’exception de la partie commune du L3.

    L1 : Activités de biologie moléculaire et de bactériologie avec des OGM de classe 1 (C1)

    Equipement : 1 centrifugeuses réfrigérée, 1 PSM II, 1 incubateur de bactériologie, 1 spectrophotomètre, 1 pH mètre, matériel d’électrophorèse pour l’étude de l’ADN et des protéines, container de stockage azote, +4°C, -20°C et -80°C.

    L2  : Activité de culture de cellules eucaryotes et de productions / infection virales avec des OGM de classe 2 (C2).

    Equipement : 1 ultracentrifugeuse, 2 centrifugeuses dont 1 réfrigérée, 2 PSM II, 3 incubateurs CO2, 1 microscopes inversé à épi-fluorescence, 1 système de chromatographie FPLC relié à un ordinateur, 1 réfractomètre, +4°C et -20°C.

    L3 : Activité de culture de cellules eucaryotes et de productions / infections virales avec des OGM de classe 3 (C3).

    L’équipement est réparti sur deux pièces de travail et une antichambre : 1 ultracentrifugeuses, 3 centrifugeuses dont 1 réfrigérée, 3 PSM II, 2 incubateurs CO2, 1 incubateur de bactériologie, 1 microscopes inversé à épi-fluorescence, 2 +4°C, 2 -20°C et 1 -80°C. Le local dispose d’un autoclave double entrée.

    Plateforme vecteurs viraux et transfert de gènes

    IFR 94 (IRNEM) – Université Paris Descartes
    Faculté de Médecine de l'Hôpital Necker Enfants-Malades

    Bâtiment Leriche, Porte 9

    96 Rue Didot

    CS 61431

    75993 Paris Cedex 14 

    Tél : 01 72 60 63 42

    Tél : 01 72 60 63 43 (DECT bâtiment Leriche)

     

    Plan d’accès plateforme VVTG

    Le demandeur (personne demandant une prestation) et son responsable scientifique devront prendre connaissance des Conditions générales de prestations VVTG qui régissent le fonctionnement de la plateforme vis-à-vis de ses clients.

    1. Prestations 

    La plateforme VVTG réalise des productions à façon de vecteurs viraux recombinants utilisés en transfert de gènes : lentivirus, rétrovirus, adénovirus (AAV en projet). Ces virus, défectifs pour la réplication, sont destinés uniquement à des fins de recherche pour des applications in vitro, ou in vivo chez le petit animal.

    Les virus produits :

    • Adénovirus (Ad5) ΔE1/ΔE3,
    • Lentivirus HIV-1 ΔU3 SIN, enveloppe : VSV-G,
    • Rétrovirus murin Mo-MLV

    En projet : AAV (génome de type 2) avec différents sérotypes

    1. Interactions entre le demandeur et la plateforme VVTG 

    Etapes

    Demandeur / Resp. Scientifique

    Plateforme VVTG

    Informations

    Obtention d’une production virale ?

    1) Contact de la plateforme

    2) Conseils et renseignements sur les prestations

    Demande de production virale

    3) Saisie d’une demande de production dans le formulaire demande de production et envoi du formulaire

    4) Analyse du projet

    Engagement projet

    6) Signature devis estimatif et envoi

    5) Envoi d’un devis estimatif

    Envoi du matériel

    7) Renseignement de la fiche échantillon

    8) Envoi du matériel ADN/adénovirus

    9) Réception du matériel de production

    Délais

     

    10)  Proposition d’une date de réalisation

    Production virale

     

    11)  Programmation et réalisation de la prestation

    Fiche produit

    13) Accord prestation

    12)  Envoi du rapport de production viral

    Règlement prestation

    14) Engagement du processus règlement prestation

    13)  Demande de règlement de la prestation

    Livraison produit

    16) Information disponibilité

    15)  Disponibilité livraison ?

    17)  Envoi de la demande d’enlèvement livreur

    18)  Livraison du virus

    Attestation de livraison

    18) Envoi à la plateforme du rapport de production signé

     

    Suivi

    20) Valorisation scientifique de la prestation

    19)  Prestation adaptée au besoin ?

     

    1. Caractéristiques des productions virales de la plateforme VVTG 

    Caractéristiques des productions de lentivirus et rétrovirus

    Caractéristiques des productions d’adénovirus

     

    1. Demande de production et formulaires d’envoi de matériel à la plateforme

    Adresser un mail à pour recevoir les formulaires suivants :

    • Demande de production Lentivirus - Rétrovirus
    • Demande de production Adénovirus
    • Echantillon ADN
    • Echantillon Adénovirus

    L’envoi du matériel à la plateforme est fait lorsque le devis de prestation émis par la plateforme est signé par le responsable scientifique du demandeur.

     

    1. Vecteurs viraux usuels proposés

    La plateforme dispose d’outils viraux classiquement utilisés en transfert de gènes :

    • Vecteurs d’expression lentiviraux véhiculant la GFP (avec différents promoteurs) et la construction CRE-GFP (promoteur CMV)
    • Lots de vecteurs adénoviraux :
    • adénovirus GFP,
    • adénovirus CRE-GFP,
    • adénovirus béta-galactosidase

    Contactez la plateforme pour la disponibilité de ces vecteurs.

     

    1. Délai de prestation

    Un délai de prestation (non contractuel) sera estimé à partir de la date de réception du matériel ADN ou du virus nécessaire aux productions virales.

     

    1. Valorisation de l’activité de la plateforme

    Cette reconnaissance de l’activité de la plateforme est indispensable. Se référer aux Conditions générales de prestations VVTG.

     

     

    Tarification / Devis prestation

    Le client indiquera sa catégorie d’appartenance  par rapport aux trois niveaux de tarifications :

    • Université Paris Descartes, Circonscription INSERM Paris V (PV)
    • Académiques, extérieurs à l’Université Paris Descartes (A)
    • Non Académiques ou privés (P).

    Information tarifs, contacter la  plateforme : - 01 72 60 63 42

    Emission d’un devis de prestation :

    Un devis de prestations sera émis lorsque la plateforme recevra le formulaire de demande de production virale renseigné par le demandeur.

    Prise en charge la prestation :

    La prise en charge de la prestation sera faite lorsque le devis signé, avec la mention « Bon pour acceptation » du responsable scientifique du laboratoire du demandeur, sera renvoyé à la plateforme par e-mail. Tout devis rectificatif suivra la même procédure.

     

    Agrément OGM/classe de risque

    La manipulation d’OGM viraux est règlementée par le Haut Conseil des Biotechnologies (HCB). L’obtention d’un agrément est nécessaire à l’activité de la plateforme VVTG ainsi qu’à la structure de recherche utilisatrice des productions virales de la plateforme.

    La plateforme a des agréments OGM pour :

    • La manipulation d’OGM de classe 2 (C2) en confinement L2 
    • La manipulation d’OGM de classe 3 (C3) en confinement L3

    La structure de recherche qui réceptionne et utilise les virus :

    Les virus produits par la plateforme sont OGM viraux de classes 2 ou 3. Le directeur du laboratoire demandeur est responsable de l’application des règles d’hygiène et sécurité de sa structure et du respect de la règlementation sur les OGM viraux de classe 2 (manipulation en L2) ou de classe 3 (manipulation en L3).

    Le demandeur doit pour cela, contacter l’assistant de prévention de sa structure qui le guidera dans la rédaction de la demande d’agrément OGM (ou de son complément d’agrément) et dans la connaissance des conditions de manipulation et de transport de ces OGM.

    Les directives de la règlementation OGM sont décrites par l’HCB. Liens utiles :

     

    Accès L3

    Le L3 de Broussais est un nouveau plateau technique géré par la plateforme VVTG.

    Responsable de confinement : Sylvie. Fabrega - 01 72 60 63 42

    Référent scientifique : - 01 72 60 65 11

    Le local dispose d’un  Règlement intérieur L3 VVTG et de Modalités d’accès et d’activité L3 VVTG.

    Le formulaire de Demande d’activité L3 VVTG devra être rempli par le demandeur pour l’examen de son projet d’activité L3 par le comité de gestion du L3.

    Réservation des PSM II du L3

     

    Règlement intérieur

    Le Règlement intérieur VVTG de la plateforme VVTG est validé par le Comité de gestion des plateformes de l’Université Paris Descartes.

    Les prestations de la plateforme sont régies par le document des Conditions générales de prestation VVTG.

    Publications scientifiques associant la plate-forme :

    1. Christine Salaün et al. Identification of a Novel Transport-independent Function of PiT1/SLC20A1 in the Regulation of TNF-induced Apoptosis. The Journal of Biological Chemistry. vol. 285, no. 45, pp. 34408–34418, November 5, 2010.

    2. Frédérique Rau et al. Misregulation of miR-1 processing is associated with heart defects in myotonic dystrophy. Nature Structural & Molecular Biology 2011.

    3. Vanessa Sancho-Shimizu et al. Herpes simplex encephalitis in patients with autosomal recessive and dominant TRIF deficiency” J Clin Invest. 2011 Dec; 121(12):4889-902.

    4. Mylène Heinis et al. HIF1alpha and pancreatic beta-cell development. FASEB J. 2012 Mar 20.

    5. Soggia A. et al.  Activation of the transcription factor carbohydrate responsive element-binding protein by glucose leads to increased pancreatic beta cells differentiation. Diabetologia. 2012 Oct;55(10):2713-22.

    6. Ivan Nemazanyy. Defects of Vps15 in skeletal muscles lead to autophagic vacuolar myopathy and lysosomal disease. EMBO Mol Med. 2013 Jun; 5(6):870-90.

    Consultation de documents : protocoles et applications des vecteurs viraux en transfert de gènes.